تست PCR

در زمان های گذشته جهت تولید قطعات نوکلئوتیدی معمولا از آزمایشات و روش های شیمیایی متعددی استفاده می شد یا برای اینکه چندین نسخه از یک ژن خاص به دست آورند مجبور بودند آن ژن را در درون یک حامل مناسب بفرستند و در باکتری تکثیر کنند همه این روش ها نیاز به زحمت زیادی داشتند و مدت زمان طولانی صرف این کار می شد. تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز که همان PCR نام دارد این مشکل را حل کرد. این تکنیک به منظور تکثیر کردن یک قطعه DNA انجام می شود، که این روش نخستین بار در سال ۱۹۸۴ توسط کری مولیس انجام گرفت.

چه زمانی از این دستگاه استفاده میشود :

معمولا از این دستگاه برای تشخیص هویت، تشخیص بیماری های مختلف، انجام آزمایش های پیش از تولد، آزمایش تعیین جنسیت جنین و بررسی روابط ژنتیکی استفاده میشود .
با توجه به شرایط فعلی، سازمان‌ بهداشت جهانی و مرکز کنترل بیماری‌های عفونی تست پی سی آر را (RT-PCR) به‌عنوان دقیق‌ترین روش تشخیص ویروس کووید19 ( COVID-19 – SARS-CoV-2 ) اعلام کرده است.برای انجام این روش از دستگاهی به نام ترمو سایکلر استفاده میشود که در ادامه به آن می پردازیم
ترموسایکلر دستگاهی است که امروزه از آن استفاده های بسیار زیادی می شود. این دستگاه در علوم بالینی برای تقویت DNA به کار برده می شود دستگاه ترموسایکلر با کمک روش و اصول پی سی آر موجب تکثیر DNA می گردد که این کار باعث تشخیص خیلی از بیماری ها میشود . این دستگاه دارای سه مرحله کاری می باشد که در ابتدا به اقلا م مورد نیاز و سپس به روش کار آن اشاره میکنیم .

مزایای تست PCR :

PCR دارای مزایای بسیار زیادی است از جمله مزایای آن می توان به بررسی کردن نمونه ها در یک روز، ارزان بودن آن، اختصاصی بودن و آسان انجام شدن اشاره کرد. در حال حاضر این تکنیک در کلیه آزمایشگاه های زیست مولکولی با ارایه خدمات شرکت فرآزما تحقیق در حال انجام است .

تجهیزات ، مواد و اقلام مصرفی جهت انجام تست PCR :

دستگاه ترموسایکلر
دستگاه میکرو سانتریفیوژ
سواب اورال و نازال( سواب دهان و سواب بینی )

میکروتیوب

استریپ هشت خانه
استریپ چهار خانه
(Filter Pipet Tips)نوک سمپلر فیلتر دار
کرایوتیوب
لوله فالکون استریل
نمونه هدف :DNA
آب برای به حجم رساندن :H2O
به منظور بهبود فعالیت و پایداری آنزیم پلیمراز از این ماده استفاده میشود. :Buffer
دزوکسی نوکلئوتید های 3 فسفاته :DnTp
به منظور جهش زایی نمونه هدف از کاتیون های 2 ظرفیتی استفاده میشود :Mg2+
آغازگر رفت :Primer Forward
آغازگر برگشت :Primer reverse
آنزیم پلیمراز جهت اتصال اجزا به هم : Tag

توضیحات کلی در مورد برخی از اقلام مصرفی تست PCR :

نوک سمپلر فیلتردار :

نوک سمپلر یا تیپ وسیله ای برای انتقال محلول ها می باشد این کالا معمولا در رنگ ها و حجم های مختلف موجود است از طرفی به دلیل حساس بودن انتقال مواد در ضمینه نمونه های ژنتیکی ، از تیپ های فیلتر دار و استریل به جهت جلوگیری از انتقال آلودگی استفاده میشود در همین راستا شرکت فرآزما تحقیق با داشتن برند هایSelecta , Gsbio آماده ارایه خدمات به مشتریان عزیز می باشد .

میکروتیوب :

میکروتیوب ها انواع مختلفی دارند که به شرح زیر است:
میکروتیوب پیوسته یا استریپ : این نوع میکروتیوب ها یا استریپ ها در ضمینه PCRمورد استفاده قرار میگیرند که خود آن دارای 2 بخش 4 و 8 استریپ می باشد تفاوت این دو ، در نوع دستگاه ها می باشد که برخی از برند ها اعلام میشود
8 استریپ Rosh , Abi , Biorad
4استریپ Gene , Rotor
در این ضمینه میتوان به حجم این میکروتیوب ها اشاره کرد که با توجه به شرایط کاری معمولا 0.2 و0.1 میلی لیتر می باشد . همچنین در بعضی از مواقع از میکروتیوب های رنگی برای نمونه هایی که حساس به اکسیداسیون های نوری هستند استفاده میشود .لذا شرکت فرآزما با داشتن استریپ های با کیفیت و متنوع در سایز های مختلف از برند های Selecta , Gsbioآماده خدمات رسانی به مشتریان عزیز می باشد.

میکروتیوب

این نوع از میکروتیوب ها که معمولا شفاف هستند برای آماده سازی Master mix و سانتریفیوژ کردن نمونه ها استفاده میشود .به همین خاطر باید دارای استحکام لازم باشد تا در دور بالا آسیب نبیند و باعث خراب شدن نمونه نشود چرا که خراب شدن نمونه هم هزینه سنگینی برای مرکز دارد و هم باعث اتلاف وقت میشود در همین راستا ما تلاش کردیم تا با ارایه سانتریفیوز مناسب و با کیفیت از کمپانی Selecta lab و میکروتیوب های با کیفیت از کمپانی GSbio , Selects به این کار اهمیت ببخشیم ، تا در این شرایط بحرانی وظیفه خود را نسبت به همکاران راه سلامت اجرا کرده باشم .

کرایوتیوب :

از این لوله های کوچک برای نگهداری نمونه های بیولوژیک مانند DNA ، پروتئین و سلول های فریز شده استفاده میشود .

آماده سازی نمونه:

در آزمایش کرونا ( PCR ) با کمک سوآب از حلق و یا بینی بیمار نمونه گرفته می‌شود.)برند good care یکی از بهترین برند های بازار بوده که با داشتن بیشترین جذب به این امر کمک بسیاری میکند(. سپس باید این نمونه ازنظر وجود یا عدم وجود ویروس SARS-CoV-2 موردبررسی قرار گیردکه در این حالت ابتدا استخراج ژنوم ویروس از نمونه با کمک کیت‌های استخراج و سانتریفیوژ SELECTALAB انجام و سپس با کمک روش PCR این ژنوم ویروسی تکثیرشده تا قابل‌شناسایی شود.

عملیات دستگاه PCR معمولا از 3 مرحله تشکیل میشود که به شرح زیر است :

1 جداسازی Denaturation

در این مرحله که اصطلاحا ذوب DNA نام دارد ، DNA دورشته ای تابیده شده با استفاده از دمای بالا که در بازه 92 الی 98 درجه سانتی گراد است جدا میشود . مدت زمان این کار حدودا 30 ثانیه می باشد .

2 اتصال پرایمر ها Annealing

در این مرحله اتصال پرایمر ها صورت میگیرد ، اتصال پرایمر ها به جهت این است که آنزیم پلیمراز بتواند از محدوده فوق اتصال مونومر ها( نوکلئوتید ها ) را انجام دهد.لازم به ذکر است پرایمر ها ذوج بوده و از قبل با توجه به هدف مورد نظر انتخاب میشوند .در این مرحله نمونه باید به مدت 40 ثانیه در دمای 55 الی 65 درجه سانتی گراد بماند .

3 گسترش توالی Extension

در این مرحله اتصال نوکلئوتید ها صورت میگیرد که این کار وظیفه آنزیم پلیمراز است، آنزیم پلیمراز یک آنزیم مقاوم به حرارت است که ایجاد رشته های جدید را انجام می دهد .زمان لازم برای این کار حدودا بین 5 الی 15 دقیقه می باشد.

شرکت فرآزما تحقیق در راستای کمک به جلوگیری و تشخیص بیماری کویید 19 با بیش از 20 سال تجربه کار در ضمینه تجهیزات و اقلام مصرفی آماده خدمت رسانی به تمامی مراکز محترم می باشد .